在显微镜下观察细胞状态，记录细胞密度、贴壁情况、死亡碎片、团块情况和是否需要拍照留存。

准备Decimase消化液，确认名称、浓度、批号、有效期和开封状态。

准备PBS（无钙、镁）、RPMI 1640 或对应细胞维持培养基，用于清洗、稀释消化酶和收集细胞。

建议将 PBS、RPMI 1640 或对应培养基预温至 37℃。

若细胞消化后容易成团，建议提前准备剪口 1 mL 枪头，用于后续轻柔吹打和分散团块。

每个样本建议至少准备 2 支 15 mL 离心管：一支用于原始收集，一支用于离心后二次分散后的转移。

吸弃原培养基，用预温PBS 轻轻洗涤一次后完全吸除，避免残留稀释Decimase消化液。

每孔加入 1 mL Decimase 消化液，使酶液覆盖细胞表面，轻轻晃动培养板，使酶液均匀分布，放入 37℃培养箱开始消化并记录开始时间，随后每 10 min 在显微镜下观察 1 次细胞状态（参考消化时间为 15-30 min，可根据细胞状态调整）。

注：消化终点可参考以下表现判断是否可以结束消化：细胞层整体开始松动，边缘区域可被轻柔吹起，大部分细胞由铺展状态转为圆形或半脱落状态，且轻柔吹打后细胞可从培养表面脱落；若未达到上述表现，可继续消化并按 10 分钟间隔观察，消化不足时不建议强力反复吹打，以免造成局部细胞损伤或团块不均一。

当达到消化终点时，加入2 mL预温RPMI 1640（含10 μM Y27632） 或对应细胞维持培养基（含10 μM Y27632） 终止消化，使用剪口 1 mL 枪头轻柔冲洗培养表面以帮助细胞脱落（若仍有较多团块，可继续用剪口 1 mL 枪头轻柔吹打，吹打时需避免产生大量泡沫、避免枪头紧贴细胞层反复刮擦），随后将细胞悬液转移至 15 mL 离心管。使用离心管中的培养基润洗一次容器表面以尽可能多地收集细胞。

5.200 g 离心 5 分钟，离心后需小心吸弃上清、避免扰动沉淀，团块可使用剪口 1 mL 枪头轻柔吹打分散。

注：离心后部分细胞可能更容易聚集成团，对于心肌细胞等易形成团块的细胞，建议进行二次轻柔分散。操作如下，先观察离心后细胞沉淀和团块状态，加入适量预温培养基或后续所需体系，用剪口 1 mL 枪头轻柔吹打，将已吹散、悬浮较均匀的细胞液转移到新的 15 mL 离心管，对原管内剩余较大团块继续轻柔吹打，当剩余团块较少、主要呈丝状或难以分散结构时，可停止吹打，避免过度机械损伤。

心肌细胞接种培养基（R3-01-015）轻柔重悬细胞，取样进行细胞计数和活率检测，建议记录总细胞数、活细胞数、活率、团块残留情况和丝状残留情况，再根据实验目的进入传代、重铺、冻存或后续功能实验。